很多人在做檢測的時候,都不太在意ELISA試劑盒中的說明書上的檢測步驟,覺得自己都知道,都懂的。但就是因為這種心態(tài),所以造成有時候的檢測結果出現失誤。生物檢測本來就是個很嚴肅并且嚴謹的事情,你的一個小的疏忽可能就會造成意想不到的錯誤。
正確的使用ELISA試劑盒的步驟:
1.在使用之前要將試劑充分的混合均勻,但是要注意在搖晃的時候不要產生過多的泡沫,從而造成有太多的空氣進入試劑中,產生測試誤差。
2.根據要檢測樣品的數量來確定的板條數。每個比對的樣品和空白孔是做復孔,而樣品的數量就可以自己視情況而定,不過能用復孔的還是用復孔。將標本液體1:1稀釋后倒入50微升的反應孔中。ELISA試劑盒
3.在反應孔中在加入50微升的待測樣品,然后馬上加入50微升的生物素標記抗體,蓋上模板,輕輕搖晃使其混合均勻后,在37攝氏度的恒溫下等待1小時。
4.將孔內液體甩去,加滿洗滌液,震蕩約30秒后,在甩去洗滌的液體,用紙將水吸干。這樣子重復三次。再在沒空加入80微升的親和鏈酶素-HRP,同上混合均勻后,在37攝氏度的恒溫環(huán)境下等待半小時。
5.同步驟四的洗滌方法。洗滌干凈后,在沒空中加入底物A,B各50微升,小心混合均勻,避免光照在37攝氏度下等待10分鐘。ELISA試劑盒
6.取出酶標板,迅速加入終止液50微升,測定結果。在450納米的波長處檢測各個孔的OD值。