染色結(jié)果的觀察
1、陽性結(jié)果應(yīng)定位在細(xì)胞相應(yīng)的部位,在細(xì)胞膜表達(dá)的抗原陽性結(jié)果應(yīng)定位在細(xì)胞膜上,在其他部位的陽性反應(yīng)均為非特異性染色。不當(dāng)?shù)目乖迯?fù)會(huì)導(dǎo)致抗原在組織細(xì)胞中定位的改變。根據(jù)所檢測(cè)抗原的不同,抗原分別定位在:
(1)細(xì)胞膜:如LCA和CD3、CD20等;
(2)細(xì)胞質(zhì):如Cytokeratin 、GFAP、S100 、CgA、AFP等;
(3)細(xì)胞核:如Ki-67、ER、PR、TTF-1、HPV-Ag、Cyclin D1、TDT等。
2、組織的周邊、氣泡、刀痕、皺折等部位往往呈現(xiàn)非特異性陽性表達(dá)。
3、染色結(jié)果呈陰性并非都是抗原不表達(dá),要考慮是否與組織中的抗原受到破壞有關(guān)。
4、組織切片背景深與下列因素有關(guān):
(1)石蠟切片脫蠟不干凈;
(2)*抗體濃度過高或孵育時(shí)間過長,溫度過高;
(3)顯色劑DAB濃度過高或H2O2太多;細(xì)胞
(4)抗體不純;
(5)抗體孵育后切片清洗不干凈。