膠體金免疫層析技術(shù)已其單份檢測、簡單快速、特異靈敏、無需輔助試劑和儀器、肉眼觀察結(jié)果、結(jié)果可長期保存等特點(diǎn),成為當(dāng)今zui快速靈敏方便的免疫學(xué)檢測技術(shù)之一,特別適用于醫(yī)院、基層單位、野外作業(yè)以及時(shí)間緊迫的檢查和大面積普查。
隨著膠體金層析技術(shù)的進(jìn)步,膠體金結(jié)合物的靈敏度逐步提高。目前,在大多數(shù)快速診斷分析中,檢測下限達(dá)到1ng/ml。如果采用高質(zhì)量的抗體,快速診斷分析檢測下限甚至可以達(dá)到10pg。隨著銀增強(qiáng)技術(shù)對檢測靈敏度的進(jìn)一步提高,或許檢測靈敏度會(huì)提高10-100倍。
膠體金免疫層析檢測的底層一般是硝酸纖維素膜,在它上面固定了檢測蛋白,通常是抗體或抗原。連接著膜的是包含有干燥金標(biāo)的金標(biāo)墊(通常是玻璃纖維)。在現(xiàn)有的大部分試紙條中,金標(biāo)墊的金顆粒能特異性吸附于檢測物的抗體或抗原。樣品墊通常是紙,粘貼著金標(biāo)墊。當(dāng)液體樣品用在樣品墊上,液體由毛細(xì)作用力擴(kuò)散通過金標(biāo)墊,使干燥金標(biāo)復(fù)水并使得樣品中的分析物特異性作用于金標(biāo)。金標(biāo)和分析物的復(fù)合物擴(kuò)散到膜上,并向檢測蛋白移動(dòng),在那里復(fù)合物被固定住,產(chǎn)生清楚的信號(hào)——一條紅線。第二條線是控制線,在膜上由多余的金標(biāo)記顯色形成,用于表示檢測完成和質(zhì)量控制。
在快速診斷應(yīng)用的初期是用乳膠作為標(biāo)記物來產(chǎn)生信號(hào),現(xiàn)在仍有一些產(chǎn)品使用這個(gè)方法。過去和現(xiàn)在,乳膠法一直是凝集反應(yīng)主要的標(biāo)記方法,這是因?yàn)樗诮Y(jié)合成分的存在下易于凝集。但對于快速診斷試劑來說,標(biāo)記物的穩(wěn)定性對避免假陽性是非常重要的,因此易凝集的特性會(huì)成為大難題。因?yàn)榫哂袕?qiáng)潛在穩(wěn)定性,金標(biāo)記在80年代后期被引入到快速診斷試劑中。在合適的條件下,任何大小的金顆粒都可以。的高穩(wěn)定性、高靈敏度、高精度和高可重復(fù)性使得金適合用于在快速診斷試劑中性,降低金標(biāo)的非特異性結(jié)合。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)和金顆粒正確連接時(shí),蛋白質(zhì)能牢固地結(jié)合在金顆粒表面,無論是液態(tài)或固態(tài)都能保持長久的穩(wěn)定。抗體