培養(yǎng)基細(xì)胞實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境和用到的器皿
培養(yǎng)基細(xì)胞在體外培養(yǎng)中所需的條件與體內(nèi)細(xì)胞基本相同。
1、無污染環(huán)境
培養(yǎng)環(huán)境無毒和無菌是保證細(xì)胞生存的首要條件。當(dāng)細(xì)胞放置于體外培養(yǎng)時(shí),與體內(nèi)相比細(xì)胞丟失了對(duì)微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代謝物質(zhì)積累等,可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。因此在進(jìn)行培養(yǎng)中,保持細(xì)胞生存環(huán)境無污染、代謝物及時(shí)清除等,是維持細(xì)胞生存的基本條件。
2、恒定的溫度
維持培養(yǎng)基細(xì)胞旺盛生長,必須有恒定適宜的溫度。人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5℃±0.5℃,偏離這一溫度范圍,細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響,甚至死亡。培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)低溫的耐受力較對(duì)高溫強(qiáng),溫度上升不超過39℃時(shí),細(xì)胞代謝與溫度成正比;人體細(xì)胞在39-40℃1小時(shí),即能受到一定損傷,但仍有可能恢復(fù);在40-41℃1小時(shí),細(xì)胞會(huì)普遍受到損傷,僅小半數(shù)有可能恢復(fù);41-42℃1小時(shí),細(xì)胞受到嚴(yán)重?fù)p傷,大部分細(xì)胞死亡,個(gè)別細(xì)胞仍有恢復(fù)可能;當(dāng)溫度在43℃以上1小時(shí),細(xì)胞全部死亡。
3、氣體環(huán)境
氣體是人體細(xì)胞培養(yǎng)基生存必需條件之一,所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。氧氣參與三羧酸循環(huán),產(chǎn)生供給細(xì)胞生長增殖的能量和合成細(xì)胞生長所需用的各種成分。開放培養(yǎng)時(shí)一般把細(xì)胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環(huán)境中。
二氧化碳既是細(xì)胞代謝產(chǎn)物,也是細(xì)胞生長繁殖所需成分,它在細(xì)胞培養(yǎng)中的主要作用在于維持培養(yǎng)基的PH值。大多數(shù)細(xì)胞的適宜PH為7.2-7.4,偏離這一范圍對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將產(chǎn)生有害的影響。但細(xì)胞耐酸性比耐堿性大一些,在偏酸環(huán)境中更利于細(xì)胞生長。有資料顯示,原代羊水細(xì)胞培養(yǎng)PH6.8時(shí)zui適。
細(xì)胞培養(yǎng)液PH濃度的調(diào)節(jié)zui常用的為加NaHCO3的方法,因?yàn)镹aHCO3可供CO2,但二氧易于逸出,故zui適用于封閉培養(yǎng),而輕乙基哌嗪乙硫磺酸(HEPES)因其對(duì)細(xì)胞無毒性,也起緩沖作用,有防止PH迅速變動(dòng)的特性而用于開放細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中,其zui大優(yōu)點(diǎn)是在開放式培養(yǎng)或細(xì)胞觀察時(shí)能維持較恒定的PH值。
細(xì)胞培養(yǎng)基以玻璃器皿為主,常準(zhǔn)備zui需是使用zui的三倍。器皿應(yīng)選擇透明度好、無毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面幾種。
?。?)液體儲(chǔ)存瓶:用于儲(chǔ)存各種配制好的培養(yǎng)液、血清等液體,常以500ml、250ml、100ml生理鹽水瓶或血漿瓶代替。
?。?)培養(yǎng)瓶:根據(jù)培養(yǎng)細(xì)胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異,用于細(xì)胞傳代培養(yǎng)的細(xì)胞要求瓶壁厚簿均勻,便于細(xì)胞貼壁生長和觀察,瓶口要大小一致,口徑一般不小于1cm,允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位,規(guī)格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等幾種。用于外周血培養(yǎng)的常用10ml普通圓瓶。兩種培養(yǎng)瓶均要求選用玻璃制成。
(3)培養(yǎng)基皿:用于開放式培養(yǎng)及其它用途。分直徑30mm、60mm、120mm等幾種。
?。?)吸管:常用的有長吸管和短吸管兩類,長吸管也稱刻度吸管。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管,刻度吸管用于移動(dòng)液體。常用1ml和10ml兩種。短吸管也叫滴管,分彎頭和直頭兩種。
?。?)離心管:離心管是細(xì)胞培養(yǎng)中使用zui廣泛的器皿,根據(jù)用途不同形態(tài)各樣,常用于細(xì)胞培養(yǎng)的離心管有大腹式尖底離心管和普通尖底離心管兩類。前者分別為50ml、30ml、15ml;后者則多為10ml和5ml。
(6)其它:如三角燒瓶、燒杯、量筒、漏斗、注射器等。