RNA電泳液
產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是預配的10 X RNA電泳液(即10 X MOPS電泳液),專門用于
RNA電泳分析。
1. 即開即用,用戶不需要自己進行RNase滅活、高壓滅菌、pH調(diào)節(jié)等操作。
2. 與Northern雜交等后續(xù)反應兼容。
規(guī)格及成分
成 份
100 mL包裝
(3150-100)
RNARUN 100 mL
使用手冊 1份
運輸及保存 常溫運輸,4℃保存。
自備試劑 瓊脂糖、37%甲醛、EB (10 mg/mL)、去離子甲酰胺。
使用方法
一、用本產(chǎn)品配制瓊脂糖甲醛變性膠(1.2%, 100 mL)
1. 在三角瓶中加入下列成份:
瓊脂糖 1.2 g
DEPC水 87 mL
2. 將瓊脂糖加熱融化后,加入10 mL本產(chǎn)品。
3. 待膠冷卻至60 °C左右,再加下列成份:
37%甲醛 3.0 mL
EB (10 mg/mL) 2-4 μL
4. 混勻后倒膠, 凝固半小時后即可以使用瓊脂糖甲醛變性膠(需要量
RNA變性上樣液和RNA電泳液)。
二、用本產(chǎn)品配制RNA變性上樣液(以一個RNA樣品為例)
本產(chǎn)品 2.0 μL
37%甲醛 3.5 μL
去離子甲酰胺 10.0 μL
RNA樣品 4.5 μl
于85° 變性10 min,冰浴冷卻5分鐘后加上樣液(可以使用普通的6
X DNA上樣液)后直接上樣。
三、用本產(chǎn)品配制RNA電泳液
將本產(chǎn)品用無RNase的水稀釋十倍后即可直接用于RNA的瓊脂糖甲醛
變性膠使用。
四、電泳條件
電泳時,將凝膠預電泳5 min(電壓為5 V/cm)。隨后加樣品和分子
量對照(如果有的話),以 3-4 V/cm 的電壓電泳,直至溴酚藍遷移至
膠下游的3/4處。電泳結(jié)束后,在紫外燈下拍照。
【注意事項】
每一泳道至多可分析 30 μg RNA,通常用 10-20 μg 總 RNA 進行
Northern雜交,可以檢測高豐度mRNA(占mRNA總量的0.1%以上);
如待測RNA含量極微,每個泳道需加0.5-3.0 μg poly(A)+ RNA。
溴酚藍泳動速度相當于300bp DNA,二甲苯青FF泳動速度相當于4
Kp DNA。