羊源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 使用化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)聚合酶,反應(yīng)特異性高,*程度地避免了非特異擴(kuò)增;
2. 反應(yīng)緩沖液經(jīng)充分優(yōu)化,反應(yīng)靈敏快速,40個(gè)循環(huán)只需20多分鐘;
3. 抗干擾能力強(qiáng),反應(yīng)重復(fù)性高,適合對(duì)土壤、糞便、腫瘤和血液來(lái)源的復(fù)雜樣本中的靶基因進(jìn)行檢測(cè)分析。
在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
特異性熒光標(biāo)記:
TaqMan法
TaqMan探針的特性:
(1)5′端標(biāo)記有報(bào)告基團(tuán)(Reporter, R),如FAM、VIC等
(2)3′端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán) (Quencher, Q)
(3)探針完整,R所發(fā)射的熒光能量被Q基團(tuán)吸收 ,無(wú)熒光, R與Q分開,發(fā)熒光
(4)Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性,可水解探針
相對(duì)定量通過內(nèi)標(biāo)定量:
內(nèi)標(biāo)(Endogenous Control)通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因,在細(xì)胞中的表達(dá)量或在基因組中的拷貝數(shù)恒定,受環(huán)境因素影響小,內(nèi)標(biāo)定量結(jié)果代表了樣本中所含細(xì)胞或基因組數(shù)量。
小鼠神經(jīng)干細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)
人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞
人腦血管平滑肌細(xì)胞
人海馬神經(jīng)元
人少突膠質(zhì)細(xì)胞
人星形膠質(zhì)細(xì)胞
小鼠成纖維細(xì)胞(EGFP標(biāo)記)
mCF, 小鼠心臟成纖維細(xì)胞
MN-c, 小鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元
MSC, 小鼠雪旺細(xì)胞
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞
CSC, 小鼠心肌細(xì)胞
mEPC, 小鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞
NSC,大鼠神經(jīng)干細(xì)胞
RN-h, 大鼠海馬趾神經(jīng)元
rEPC,大鼠內(nèi)皮祖細(xì)胞-骨髓
RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元
RN-s, 大鼠紋狀體神經(jīng)元
RSC, 大鼠雪旺細(xì)胞
RA, 大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
RLF, 大鼠淋巴成纖維細(xì)胞
rRTEC, 大鼠腎小管上皮細(xì)胞
rCSC, 大鼠心肌細(xì)胞
RDFs, 大鼠真皮成纖維細(xì)胞
RLFs, 大鼠肺成纖維細(xì)胞
rCF, 大鼠心臟成纖維細(xì)胞
MN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元
MN-s, 小鼠紋狀體神經(jīng)元
mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞
MA, 小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞
MLF, 小鼠淋巴成纖維細(xì)胞
mRTEC, 小鼠腎小管上皮細(xì)胞
CSC, 小鼠心肌細(xì)胞
小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)
MEF, 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞